郑恒 , 管清杰 , 柳参奎

东北油田盐碱植被恢复与重建教育部重点实验室, 盐碱地生物资源环境研究中心, 东北林业大学, 哈尔滨, 150040
作者    通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2013 年, 第 11卷, 第 2 篇   doi: 10.3969/mpb.011.000152
收稿日期: 2012年10月30日    接受日期: 2012年11月26日    发表日期: 2012年12月22日

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迄今，已从水稻中发现多种参与非生物胁迫反应的锌指蛋白基因，多为C2H2型，对于水稻C2HC型锌指蛋白基因的研究少有报道。本研究用RT-PCR技术从日本晴cDNA中克隆已知基因(AK103785)全长1 019 bp，编码339个氨基酸。经BLAST比对，确定其含有一个C2HC型锌指结构域，命名为OsC2HC-1，将OsC2HC-1::GFP融合导入酵母细胞和洋葱表皮细胞，亚细胞定位表明OsC2HC-1在细胞核中。实时荧光定量PCR检测80 mmol/L NaCl，30 mmol/L NaHCO₃胁迫处理水稻叶和根中OsC2HC-1基因转录表达受其诱导显著增加。小量诱导优化pGEX-6p-3::OsC2HC-1在宿主菌BL21(DE3)中原核蛋白表达条件，表明诱导时间4 h，28℃为最优条件，融合蛋白大量诱导纯化得到以包涵体的形式稳定存在，约为63 kDa的融合蛋白，为抗体的制作准备了条件。35S启动下过表达OsC2HC-1::GFP基因拟南芥萌发后期抗性分析实验表明，在125 mmol/L NaCl，1 mmol/L NaHCO₃，3 mmol/L NaHCO₃胁迫下，过表达OsC2HC-1::GFP的拟南芥比野生型优势生长，表现出较强的盐碱抗性和抗氧化性，说明OsC2HC-1基因与抗盐碱性及抗氧化性有关。

水稻；C2HC型锌指蛋白；盐碱胁迫；氧化胁迫；原核表达及纯化